Un test de détection ultrasensible du prion humain dans le LCR

DE NOTRE CORRESPNDANTE

LES MALADIES à prions, ou encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST), sont caractérisées par l’accumulation du prion anormal (PrPsc) dans le système nerveux central, à travers la conversion autocatalytique du prion cellulaire normal (PrPc) en versions mal pliées.

Le diagnostic de certitude de la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) requiert la détection du prion anormal (PrPsc) dans des biopsies cérébrales, une pratique qui est découragée du vivant du patient car trop invasive.

Dans ce contexte, voici un progrès : une équipe japonaise a maintenant développé une technique de détection ultrasensible du prion anormal dans le liquide céphalo-rachidien (LCR).

Atarashi et coll. ont perfectionné la technique QUIC qui amplifie in vitro le PrPsc. La technique QUIC utilise la protéine prion normale recombinante soluble (rPrP-sen) comme substrat, laquelle est ensemencée avec la protéine prion anormale (PrPsc), puis soumise a une agitation intermittente automatique qui favorise la conversion (d’où l’acronyme QUIC pour « quaking-induced conversion »).

Les chercheurs ont amélioré la sensibilité de cette technique, en surveillant en temps réel la cinétique de la formation des fibrilles rPrP agrégées grâce aux taux de fluorescence de la thioflavine T (ThT).

Détection de concentrations de 1 femtogramme.

Ce test appelé RT-QUIC (Real-Time QUaking-Induced Conversion) permet de détecter en quarante-huit heures des concentrations de l’ordre de 1 fentogramme (ou 10^-15 gramme) de PrPsc dans dans des extraits cérébraux dilués de patient atteint de MCJ.

Le test RT-QUIC a d’abord été évalué dans une série japonaise de 53 échantillons de LCR, parmi lesquels 18 provenaient de patients avec MCJ confirmée, et 35 de sujets sans MCJ mais atteints d’une autre maladie neurodégénérative. Le test s’avère positif dans 83 % des cas de MCJ (15/18) et négatif chez tous les témoins.

La fiabilité du test a été confirmée dans une étude en aveugle sur 30 échantillons australiens de LCR, dont 16 cas de MCJ et 14 témoins. La sensibilité est de 87,5 % (14/16 cas) et la spécificité est de 100 % (0/14 témoins). De plus, le test évalué sur 130 échantillons de sujets japonais ayant une autre maladie neurodégénérative ne donne aucun faux-positif.

Par conséquent, estiment les chercheurs, « la détection ultrasensible du PrPsc dans le LCR par le test RT-QUIC représente une méthode précieuse pour le diagnostic précoce, rapide et spécifique de la MCJ ».

« Cette technique permet de confirmer définitivement la MCJ du vivant des patients, cependant des études supplémentaires seront nécessaires (pour préciser la sensibilité et spécificité) », déclare au « Quotidien »

le Dr Ryuichiro Atarashi (Sakamoto, Nagasaki) qui a dirigé ce travail.

Atarashi et coll, Nature Medicine, 30 janvier 2011, DOI: 10.1038/nm.2294